在数据完整性的大环境下怎样做好色谱图的积分管理

在近几年的数据完整性的监管的大环境下，大家对色谱图的关注也逐渐加大，不合理的积分也上了FDA的警告信，那我们怎样才能做好色谱图积分管理呢，笔者写了下面一个小文章与大家分享。

(1)什么是合理的积分

积分是否合理可以通过直观观察判断，合理的基线（背景）扣除和合理的峰分割通常作为积分是否合理的判断标准。

合理的积分有利于获得准确的积分结果，为了获得合理的积分结果，需要对积分参数进行反复的编辑与调整，有时甚至需要采取手动积分。

应该指出，任何积分方法都弥补不了分析方法的不足，良好的峰型和彻底的基线分离才是获得准确积分结果的前提。

（2）积分参数怎样设定

首先应说明仪器组组长和QC负责人具有设置积分参数的权限，化验员不具备该权限。

积分参数设定原则：

积分参数设定原则是，保证色谱图中所有超过检出限的色谱峰都被合理积分。

积分参数设定程序：

• 设置合适的斜率灵敏度和峰宽，保证所有色谱峰都被准确积分

• 设置合适的禁止积分区间，对溶剂峰和梯度峰禁止积分

• 根据需要设置合适的禁止积分峰高/峰面积阈值，对检测限/报告阈值以下的色谱峰禁止积分

• 设定合适的色谱峰识别时间窗，以对已知色谱峰进行自动识别

（3）标准积分方法的建立

对于某一产品固定项目的检测，一旦建立了合适的色谱图积分方法，原则上该方法适用于以后所有该检测项目色谱图的积分，该积分方法应作为标准积分方法应用于该项目的检测。

每一个产品的每一个检测项目均应在一开始由仪器组组长建立一个标准积分方法。

（4）标准积分方法的使用

化验员运行完分析序列后，调用标准积分方法对色谱图进行积分，如无异常情况，以该结果作为报告结果保存并打印色谱图。

（5）再积分的运用

5.1何时运用再积分

化验员如在使用标准积分方法过程中发现标准积分方法积分不适用，应启动再积分程序。通常标准积分方法的不适用表现在：

• 对已知峰的识别时间窗出现偏差

• 出现更多的梯度峰需要禁止积分（流动相批号的变化容易导致梯度峰的变化）

• 基线的变化导致导致标准方法不能合理积分（流动相批号的变化容易导致洗脱中基线的变化）

• 出现了更多的杂质峰导致标准方法不能合理积分

• 峰型发生变化导致标准方法不能合理积分

• 分离度发生变化导致标准方法不能合理积分

• 噪声变化导致标准方法不能合理积分

• 其他原因

标准积分方法的不适用可能会伴随着偏差的出现，比如峰识别时间窗的较大偏移可能意味着流动相制备的差错。此时应按《偏差管理规程》记录偏差并开展偏差调查。

5.2再积分程序

化验员应将标准积分方法不适用的情况告知仪器组组长，仪器组组长核实后重新建立一个适用于该色谱图的积分方法并保存该方法。化验员应将新方法（再积分方法）和标准方法处理得到的图谱保存为电子文档，并打印出纸版色谱图附在检验记录中，同时色谱图上标明标准方法处理的色谱图不适用。

应建立一个色谱图再积分记录表，记录每次启动再积分程序的原因。           

（6）手动积分

6.1何为手动积分

    本规程将重新手动改变基线（划基线）和手动切割峰定义为手动积分。而将对峰重新命名、调整识别时间窗、删除峰、反复调整积分参数等不归类于手动积分，因为对峰重新命名、调整识别时间窗、调整积分参数可以通过再积分程序实现，而对于删除峰，本规程规定该行为在任何情况下都应该被禁止。

6.2何时采用手动积分

只有在自动积分无法积分（积不上）或积分明显不合理的情况下才考虑采用手动积分。下述情况下往往需要采用手动积分：

接近于检测限/定量限的小色谱峰，自动积分难以识别

分离度不好时，自动积分不合理

基线干扰时，自动积分不合理

主成分拖尾，尾巴上的小肩峰，自动积分不合理

主成分前延，前延上的小肩峰，自动积分不合理

6.3如何手动积分积得合理

手动积分具有主观性，但通常通过直观观察即可以判断手动积分是否积得合理。

需要指出的是，以刻意增加或减少积分面积以满足系统适用性要求或质量标准为目的手动积分是绝对禁止的。

下表对照列出了工作中经常遇到的合理的和不合理的得手动积分情况：

6.4手动积分权限设置

仪器组组长和QC负责人具有手动积分的权限，化验员不具备该权限。

6.5手动积分程序

手动积分是在标准积分方法和再积分均无法满足（即自动积分无法满足）需要的情况下才采用的方法。在进行手动积分前，自动积分方法应该被尝试。仪器组组长采取合理的手动积分方法处理图谱，保存为电子文档，同时打印出纸版色谱图附在检验记录中，并在色谱图上标明采用了手动积分。

应建立一个色谱图手动积分记录表，记录每次启动手动分程序的原因。        

（7）积分程序示意图

以上就是我的一点经验的分享，希望对大家的工作有所帮助。

实验室手动积分SOP

实验室数据完整性已成FDA检查制药企业实验室数据完整性之手动积分大揭密

验室数据完整性已成FDA检查制药企业的一把利器，其中一条关于随意手动积分或者无书面程序规定手动积分，说明了FDA本身并不是不认可手动积分，而是要求是要有操作规程规定什么情况可以手动积分，如何积分，并且应保存并记录积分参数。

1.什么情况下可以进行手动积分？

1）低分离度或低响应；
2）流动相不稳定，基线紊乱，保留时间变化小； 
3）色谱柱性能：运行过程中，出现异常峰； 
4）软件积分的局限性，如由于软件参数阈值的设置导致峰未积分，峰起点和终点间出现肩峰和异常的基线漂移，软件错误（峰未积分和错误识别峰）；
5）由于样品母体的干扰导致的复杂色谱图：裂峰 、目标杂质的同时洗脱/肩峰、基线噪音、负峰、基线上升或下降（由于某些梯度程序）、峰的严重拖尾、烃类的存在导致自动积分不正确。

2.手动积分的权限及操作

操作员在数据系统自动积分不正确时，领取手动积分处理报告表并填写，手动积分申请被QC经理批准后由QC经理或QC组长（若有）或其指定人员（一般是指经验丰富的资深QC）方可进行手动积分。

3.手动积分注意事项

1）手动积分不能试图通过以下动作来使数据符合标准要求：减少峰（减少峰面积）；增加峰（增加峰面积）；改变峰高；
2）同一次检验的所有标准品、工作对照品、样品等必须使用同一方法进行手动积分。
3）手动积分结束后，应打印自动积分图谱和手动积分图谱附于手动积分申请表之后，提交QC经理审核；QC经理应复核完整的数据找出根因，基于根因制定相应的CAPA措施来避免类似事件。 
4）自动积分的图谱不得删除或被覆盖，应与手动积分图谱保存于计算机中；打印的自动积分图谱和手动积分图谱应标识清楚签名，随同手动积分申请表附于检验原始记录后面一起交质量管理部经理、QP审核无问题后归档。

4.附件：手动积分处理报告表

手动积分处理报告表