非诺贝特片仿制药与原研药溶出度一致性评价研究

Study on Consistency Evaluation of the Dissolution of Generic and Original Preparations of Fenofibrate Tablet

中国现代应用药学, 2019 年1月第36卷第2 期

石云峰，汤亚妮，付馨慰，俞雄杰，陈悦

浙江省食品药品检验研究院

目的: 建立非诺贝特片溶出度曲线测定方法，评价国内10 家仿制药产品与原研药品溶出曲线的相似性。

方法:用含0.025 mol·L⁻¹ SDS 的pH 1.0 盐酸溶液、pH 4.0 缓冲液、pH 6.8 缓冲液和水溶液4 种溶出介质，分别考察非诺贝特片仿制药与原研片的溶出状况，并通过计算相似因子(f2)评价溶出曲线的相似性。结果 国内仅1 家企业产品与原研片在4 种溶出介质中的溶出曲线均相似，其余企业产品与原研片相比溶出行为均不一致。

结论: 该方法适用于非诺贝特片的溶出曲线测定，可为非诺贝特片质量一致性评价提供参考。

非诺贝特为第二代苯氧芳酸类药物，于1974年由法国Laboratoires Fournier SAS(利博福尼)开发，最早在法国上市，在临床上得到了广泛应用[1]。

非诺贝特为水难溶性药物，属于生物药剂学分类BCS 分类Ⅱ类药物，其口服固体制剂的溶出度检查项不仅是控制药物体外质量的重要指标，也是评价药物在体内释放情况的有效手段[2]。

非诺贝特片已收载于USP39[3]、中国药典2015年版[4]和进口注册标准[5]中，其溶出度方法在溶出介质的选择、转速的设定、取样时间、限度方面、溶出液测定方法(UV 法、HPLC 法等)均存在较大的差异。

本研究采用体内外相关性预测软件GastroPlus 对现行标准溶出度条件进行了初步分析，建立了体内外相关性较好的溶出度曲线检查方法，对原研制剂及仿制药进行溶出曲线考察，并采用f2 因子进行相似性评价，为国内非诺贝特片仿制药一致性评价研究工作和处方工艺开发提供参考。

1.1 仪器

SNTR-8400AT 全自动溶出仪、LC-20AD 型高效液相色谱仪均来自日本Shimadzu 公司；CPA2245 型电子分析天平(Sartorius)；Zorbax XDB-C18柱(Agilent，150 mm×4.6 mm，5 μm)。

1.2 试剂与试药

磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、醋酸钠以及盐酸均为分析纯；十二烷基硫酸钠(SDS，国药集团化学试剂有限公司，批号：20170322，电泳级，含量≥99.0%)；溶出介质实验用水：纯净水(娃哈哈)，均采用脱气装置经42 ℃脱气1 h 后立即使用。

非诺贝特对照品(中国食品药品检定研究院，批号：100733-201502；含量：99.9%)，非诺贝特片样品信息见表1。

2.1 色谱条件

流动相为水(用磷酸调节pH 值至2.5)-乙腈(30∶70)；检测波长为286 nm，柱温为40 ℃，流速为1.0 mL·min⁻¹，进样量为10 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 

精密称取非诺贝特对照品约200 mg，置200 mL 量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，作为对照品储备液，精密量取5 mL，置50 mL 量瓶中，分别用相应溶出介质稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.2 供试品溶液 

取每批样品12 片，分别在0.025 mol·L⁻¹ SDS 的pH 1.0 盐酸溶液、pH 4.0 缓冲液、pH 6.8 缓冲液和水溶液4 种溶出介质条件下进行试验，取溶出液用0.45 μm 滤膜滤过，取续滤液即得。

2.3 溶出条件的选择

为优选出体内外相关性较好的溶出检查方法，本研究采用GastroPlus 软件建立了基于原研药的体内外相关性模型，分别采用国内外药典收载的溶出条件测定原研片，并进行体内外相关性分析，选择了体内外相关性较好(图1)的溶出度方法进行溶出曲线研究。

最终确定的溶出度实验条件为桨法，转速为75 r·min⁻¹；溶出介质：①0.025 mol·L⁻¹SDS 的pH 1.0 盐酸溶液，②0.025 mol·L⁻¹ SDS 的pH 4.0 缓冲液，③0.025 mol·L⁻¹SDS 的pH 6.8 缓冲液，④0.025 mol·L⁻¹SDS 水溶液；取样时间：10，15，30，45，60，90 min。

2.4 溶出方法学试验

国内外标准溶出液测定方法有HPLC 和UV2 种，考虑到UV 专属性相对较差，不同企业辅料可能会对测定产生一定影响，故本次研究选择采用专属性更好的HPLC 进行方法学研究。

2.4.1 线性关系考察 

精密量取“2.2.1”项下对照品储备液适量，分别用相应溶出介质溶解并稀释制成系列浓度溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，以峰面积(Y)为纵坐标，浓度(X)为横坐标建立回归方程，结果非诺贝特在各溶出介质中回归方程及线性范围见表2。

2.4.2 稳定性试验 

取“2.2.2”项下4 种介质中90 min 时的供试品溶液适量，分别于室温下放置0，2，4，8，16 h 后，按“2.1”项下色谱条件测定，结果显示非诺贝特峰面积基本无变化，4 种溶出介质中非诺贝特峰面积的RSD 分别为0.66%，0.49%，0.28%和0.55%，供试品在4 种介质中室温放置16 h，稳定性较好。

2.4.3 回收率试验 

选取占国内市场份额较大的A 企业样品进行研究，按企业处方比例配制空白辅料，称取9 份相当于1 片的量，置1 000 mL 量瓶中，分别精密加入非诺贝特对照品60，80，100 mg 各3 份，加入相应溶出介质溶解，过滤，取续滤液照“2.1”项下色谱条件测定，结果见表3，表明方法回收率良好。

2.4.4 辅料干扰试验 

取A 企业空白辅料约1 片量，分别加4 种溶出介质1 000 mL，超声振荡，过滤，取续滤液并照“2.1”项下色谱条件测定，在主峰出峰位置无干扰峰。

2.4.5 滤膜吸附性 

取“2.2.2”项下90 min 取样点溶出液经离心和滤膜分别过滤2，4，8 mL 后进行测定，结果离心后非诺贝特峰面积与过滤后峰面积基本一致，滤膜对非诺贝特基本无吸附。

2.4.6 管路吸附性 

在溶出曲线最后一个取样点分别进行手动取样和仪器自动取样并进行测定，结果2 种溶出液测得的非诺贝特峰面积基本一致，表明溶出仪管路对非诺贝特基本无吸附。

2.4.7 各品牌SDS 

对溶出曲线测定的影响 取4家国内外生产的SDS 进行试验，品牌1(含量≥99.0%)、品牌2(含量≥95%)、品牌3(含量≥86%)和品牌4(含量≥99%)配制0.025 mol·L⁻¹ SDS 的水溶液，对同一批样品进行溶出曲线测定，结果不同品牌SDS 对本品的溶出有一定影响，其中含量较低的品牌3 溶出最快，结果见图2。

2.4.8 溶出曲线测定 

取10 家生产企业样品和原研片(样品信息见表1)，测定其在4 种溶出介质中的溶出曲线，结果见图3。

2.4.9 相似因子f2 

采用相似因子f2 法评价仿制药与原研片体外溶出曲线相似性，以考察国内各企业产品与原研制剂溶出行为差异，结果见表4。

结果显示，国内仅1 家企业(J 企业)产品4 条溶出曲线与原研品相似。1 家企业(H 企业)产品在0.025 mol·L⁻¹SDS 水溶液和0.025 mol·L⁻¹ SDS 的pH 6.8 溶液与原研品相似，其余8 家企业产品与原研品在4 种溶出介质中均不相似。结果见表4。

不同品牌的SDS 对本品种的溶出会产生一定影响，试验结果表明采用纯度较低的品牌3 溶出效果反而最好。

经过对SDS 的进一步试验，发现品牌3 虽然纯度不高，但产品中除去十二烷基外还混有其他长链烷基，提高了非诺贝特溶解度，从而导致非诺贝特溶出最好。

溶出曲线研究结果表明，国内10 家企业，仅1 家企业产品与原研品溶出曲线相似，国内企业产品溶出均较原研品慢，部分企业产品90 min 溶出量仅50%，而原研品在30 min 时已基本达到溶出平台，结合非诺贝特本身理化性质等因素，并结合企业生产工艺，提示部分国内企业产品生产工艺与原研品可能存在差异，国内仿制药产品内在品质与原研片之间尚存在一定差距，建议国内生产企业在药品质量一致性评价研究过程中应对原研品进行全面剖析，从而达到与原研品质量和疗效一致的目的。

非诺贝特片已收载于中国药典2015 年版中，其溶出度检查条件为桨法；转速为100 r·min⁻¹；溶出介质为1.0% SDS；60 min 取样；限度为标示量的60%。溶出度条件、限度等设置不合理，同时研究中发现按中国药典标准进行检验，非诺贝特溶出液稳定性较差(2 h 内吸光度下降约60%)，检测速度的快慢对测定结果有较大影响。

现有国家标准已不满足控制本品质量安全有效的需要，应尽快对标准进行修订完善。

近年来，血脂异常及其并发症的发病率迅速增高，非诺贝特调脂疗效确切，市场销售额逐年增加，为抢占不断扩大的降血脂药市场，国外各大药企采用微粉化技术[7]、纳米结晶技术[8-10]、固体分散体技术[11]、自乳化技术[11-12]等研发出具有更高生物利用度的非诺贝特制剂产品。

与国外制药企业相比，我国制药企业非诺贝特制剂产品开发滞后，市场占有率低，只有开展新的研究和尝试，研制出更加高效、低毒的产品及其复方制剂，才能改变目前国内非诺贝特的市场格局。

详见原文，

中国现代应用药学, 2019 年1月第36 卷第2 期

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